Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现家兔自身突变到浮现1改型高血压针灸症状的令人满意率在成年人时期就有很差的详细描述，多个家兔自身突变特征性的成年人之前有70%在血液变换后10年中入院高血压，而随访15年的成年人这一比例降低到84%。相比较之下，占多数针灸1改型高血压一半以上的改型1改型高血压的发病机制还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始适用分期系统来假设1改型高血压的令人满意：个棒状在浮现多种家兔自身突变时转入第1期中，浮现血糖异常时转入第2期中，浮现症状时转入第3期中。一些多发家兔自身突变特征性的个棒状，在1期和2期，令人满意快速，并发展为发病的1改型高血压。我们之前详细描述了一两组在首次侦测到多种家兔自身突变样本后至较少10年无高血压的极慢速令人满意者，这两组患儿人数较少，但不同之处非常明确。随后，我们见到家兔自身上皮细胞内特异性CD8+T细胞内重排在令人满意非常慢速的患儿之前基本不长期存在，但在近期发病和长期长期存在的高血压患儿之前很容易侦测到。这可能会表明，与令人满意患儿相比较，这些患儿自身突变的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但高血压患儿长期存在一些功能性缺陷，其之前除此以外对IL-2的重排能力降低。此外，高血压患儿之前的现象CD4+T细胞内可能会对调节兼具抵抗性，表现为现象T细胞内的减缓减弱，自然造成的Treg和棒状外造成的诱导Treg，以及上皮细胞内经历的CD4+T细胞内之前IL-2重排减弱。本研究成果的旨在是详细描述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极非常慢速令人满意者之前的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的患儿血亲之前检查1改型高血压的危险因素。我们之前详细描述了长期非常慢速令人满意者的不同之处，他们保持多重家兔自身突变特征性超过10年，但无法浮现高血压的针灸症状，慢速性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名此后保持无高血压并愿意发放大量血液样本的非常慢速令人满意者确立T和B细胞内功能性分析。在目前的研究成果之前，8名慢速令人满意者(SP两组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的家兔自身突变特征性。所有的发起者都东南面1改型高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身突变对某些上皮细胞内的特征性重排，然而，一名患儿已经东南面2期至较少6年，但无法浮现针灸症状，一名患儿被诊断为高血压，该患者72岁，在采集测试样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在统计分析之前对该NADP顺利完成了另行评量。转化外周血单个质子细胞内(PBMCs)，采用多实例流式细胞内心法和T细胞内减缓试验评量NADP之前Treg的频带、表改型和功能性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)顺利完成无指导聚类分析，评量Treg表改型。

结果：与心理健康NADP相比较，来自慢速令人满意棒状的梦境CD4+T细胞内的指导聚类表明，诱导的梦境CD4+ Treg频带降低，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)暗示降低有关。一名HbA1c升高的患儿与令人满意非常慢速者和比如说的对照两组相比较，Treg谱有所不同。功能性分析表明，与心理健康NADP相比较，来自非常慢速令人满意棒状的Treg介导的CD4+现象T细胞内减缓明显受损。表现为对现象CD4+T细胞内CD25和CD134暗示的减缓降低。

上图1 深入的表改型分析表明，CD4+Treg亚改型在慢速令人满意队列之前降低。由FlowSOM聚合的Treg四楼，聚集在来自所有NADP的活命CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物暗示认定出10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)适用9个不同Treg标示聚合的10个元簇的MST。每个终端代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在终端两组远处上色。每个终端之前的饼上图说明单个标示的暗示级别。(b)每个元聚类的热上图，以表明整棒状标示暗示。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)聚合上图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的很薄。(e-l)相对金属量为每个metacluster箱终点站上图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP两组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。紫色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模改型证实，Treg频带的降低是令人满意非常慢速的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘分析(g-k)非常SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的特色上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利完成转化，各种类型FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(布氏)两组以及NADPSP 606(紫色)之前CD25+ cd127的频带汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的箱终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，圆圈突出的簇被辨识为SP和HD队列彼此间的不同。(j)箱终点站上图表明了在SP(布氏)和HD(灰点)两组之前，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对金属量(比例)。(k)直方上图表明每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示相对暗示与时代背景暗示(粉红色);上列，寄存器Treg_3;下面动身，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇之前标示的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

上图3 与心理健康献血者相比较，令人满意非常慢速者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个暗示标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热上图(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR暗示串联，表明直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADP除此以外，p< 0.05(粉红色)NADPSP 606和比如说的HD不除此以外在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR暗示，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(紫色)串联，表明直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

上图4 来自非常慢速令人满意的CD4+ treg细胞内压制现象CD4+T细胞内的能力降低。SP两组用粉红色的终点站和边框说明，HD两组用蓝色的终点站和边框说明，紫色的终点站/边框说明NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3当晚顺利完成流式细胞内心法侦测。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg培植(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。适用特征性对照(诱导的号召细胞内不含treg)量化减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

上图5 现象CD4+T细胞内对非常慢速令人满意的T细胞内再生的减缓更敏感。SP两组用粉红色的终点站和边框说明，HD两组用蓝色的终点站和边框说明，紫色的终点站/边框说明NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3当晚顺利完成流式细胞内心法(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓%-(b)。(c,d) CD25减缓%-(c)和CD134减缓%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们得出的结论是，来自非常慢速令人满意子的再生梦境CD4+Treg在GITR暗示之前得到了扩张和多样，强调了促使研究成果Treg在1改型高血压风险个棒状之前的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28